Télécharger la fiche pédagogique :     Théorie et Pratique de l'HPLC.pdf

Cette formation s'adresse aux personnes ayant déjà une première expérience de la Chromatographie en Phase Liquide (HPLC ou LC pour Liquid Chromatography) et qui souhaitent découvrir ou revoir les bases fondamentales de cette technique.

Associant cours et ateliers pratiques, notre approche pragmatique permet au stagiaire de comprendre les notions de théorie sur lesquelles reposent les conditions des méthodes qu'il utilise et les résultats qu'il obtient dans son travail au quotidien.

Connaissances requises

• notions élémentaires de chimie (pression, débit, température, volume, concentration, dilution, pH, pKa, polarité, caractère hydrophile/hydrophobe, …)
• au moins 3 mois de pratique régulière de la chromatographie en phase liquide
  

Programme du cours

Instrumentation

• constituants d’un système HPLC
• principe de fonctionnement, rôle et intérêt des dégazeurs, pompes, injecteurs,enceintes colonnes, détecteurs (UV 2D, UV 3D, Fluo, RI, DEDL)

Colonnes

• principe général de la séparation et notion de mode chromatographique
• séparation en phase normale et phase inverse, intérêt du recul d’ionisation et de l’appariement d’ions

Modes d'élution

• isocratique (principe, avantages/inconvénients)
• gradient (principe, avantages/inconvénients, démarche d'optimisation)

Exploitation des données

• principe de l’intégration
• principe de l’étalonnage externe / interne

Qualité de la séparation chromatographique

• grandeurs fondamentales k’, a, N, HEPT, R
• dispersion et diagramme de Van Deemter

Précautions d'usage

• préparation des échantillons et phases mobiles, choix des tubulures et raccords
• installation et précautions d'utilisation de la colonne, démarrage et arrêt du système

Problèmes courants et causes principales

• problèmes de pression, bruit de fond anormal ou dérive du signal
• apparition de pics parasites, déformation des pics
• problèmes de TR et/ou de surfaces

Programme des ateliers

Travaux Pratiques n°1

• examen du circuit fluidique d’un système HPLC depuis la crépine jusqu’à la sortie détecteur et identification des éléments traversés.
• injections successives d’un échantillon dans différentes conditions en mode phase inverse.
• analyse collégiale des résultats et mise en évidence :
  • du rôle et de l’influence de la polarité de la phase mobile
  • de la relation entre conditions d’analyse (colonne / phase mobile) et qualité de la séparation (grandeurs fondamentales)
  • de l’effet du débit sur les TR, les surfaces et les grandeurs fondamentales
  • de la notion de sélectivité liée à la colonne

Travaux Dirigés

Série d'exercices permettant de réviser certains points vus en cours aux chapitres Instrumentation / Colonnes / Modes d’élution / Qualité de la Séparation.

Travaux Pratiques n°2

Une dizaine de problèmes est passée en revue de la façon suivante :

• sur un système HPLC fonctionnant normalement, les stagiaires injectent un échantillon pour obtenir un chromatogramme de référence.
• à leur insu, le formateur crée un problème.
• les stagiaires injectent à nouveau, observent une anomalie puis, par groupes de 2 ou 3, essaient de déterminer l’origine du problème.
• la correction est réalisée collégialement.

Prochaines sessions

 
Les sessions se déroulent sur 3,5 jours, du mardi 9h00 au vendredi 12h30.

Tarifs 2012

• Sans séjour hôtelier : 1590 € HT
  Ce tarif inclut la formation, les documents, les pauses et les repas de midi
   

• Avec séjour hôtelier : 1950 € HT
  Ce tarif inclut la formation, les documents, les pauses, les repas de midi et 4 nuits en 1/2 pension à l'hôtel Campanile de L'Union.
  

Renseignements et inscriptions

Les demandes peuvent être adressées à Laurence BRACH-PAPA :

• par email
• par téléphone au 05 62 89 30 10
• par télécopie au 05 62 89 30 01
• par courrier à Bios Analytique - 1 rue du Mont Perdu - 31240 L'Union